细菌总数的测定
一、细菌总数
细菌总数（细菌菌落总数，CFU）是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水被生活废弃物污染程度外，还指示该饮用水能否饮用。但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染源的安全程度就更全面。
我国现行生活饮用水卫生标准（GB 5749—85）规定：细菌菌落总数在1mL自来水中不得超过100个。
二、原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。
三、仪器和材料
1. 无菌培养皿（直径90mm）10套、无菌移液管1mL2支、10 mL1支。
2. 营养琼脂培养基1瓶、活性污泥或土壤或湖水1瓶、无菌稀释水901mL1瓶、9mL的5管。
3. 接种环、洒精灯或煤气灯、恒温箱。
四、实验内容与操作方法
1. 实验样品制备。用无菌锥形瓶到现场取一定量河水或取经过破碎和过滤处理的活性污泥于三角瓶中。
2. 水样稀释。取8只装有5mL无菌水的试管分别以10、10、10、10、10、10及10，依次编号。在无菌操作下，用1mL无菌吸管吸取1mL菌液于第二支试管中吸洗3次混匀，以此方法稀释至第8支试管。
3. 平板的制作。取无菌培养皿六只编成三组每组2支，编号为10、10、10，另取1只无菌培养皿编号为空气对照。另取一支无菌吸管，从浓度小的10开始，依次从10、10、10三支试管中取0.2mL菌液放于相应的培养皿内（每个浓度2支）。然后，在无菌操作下取40~50℃左右的已灭菌的普通培养基倒入上述培养皿内，加盖后将培养皿平放在桌上，轻微顺时针和反时针来回转动培养皿，以便菌液与培养基混合均匀，然后静置，待其冷却凝固成平板，倒置放入培养箱中，30℃培养24~48h。
（五） 菌落计数方法
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1.直接计数方法
（1）将上述实验中10稀释液的试管内加结晶紫2～3滴，混匀静置5s，然后用无菌吸管吸一滴于血球计数器上。血球计数器：一块刻有网格（计算室）的特制载玻片。
（2）将血球计数器加盖玻片于显微镜下观察，先用低倍镜找到计数室（有双线），然后换成高倍镜找到计数室的中格和小格，进行细菌的计数。
（3）计数大方格中四个角的中方格及中央的一个中方格内的细菌数，每个中方格内计数四个小方格的细菌数，共计20个小方格的细菌数。
（4）将计数结果填于下表，并计算1mL菌液中的细菌总数。
各中格中菌数 计算次数 2 1 3 4 总数M 5 1mL菌液中总量数= 二次平均数 -4
×25×10×1000×N 第一次 第二次 2. 细菌的间接计数 将上述实验中培养的稀释菌液进行观察比较，记录一个稀释倍数的培养皿内的菌落数（最好选取平板上为50个左右的菌数，取2个平皿的平均数）。 菌数/毫升=平皿内菌数×5×稀释倍数。
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