分 辑 瓤一鼗 化学工程师 Ｓｕｍ２４３ Ｎｏ．１２ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ ２０１５年第１２期 ＤＯＩ：１０．１６２４７￣．ｃｎｋｉ．２３—１ １７１／ｔｑ．２０１５１２２３ ＵＨＰＬＣ法测定香附子中活性 邓仕任，朱夏敏，王春娇，夏林波 ，朱江 （辽宁中医药大学药学院，辽宁大连１１６６００） 摘要：目的：建立高效液相色谱测定香附子药材中ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ含量的方法，为香附子的合理质量 控制提供依据。方法：采用Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ１２０ＥＣ—Ｃ 色谱柱（３．０Ｘ１５０ｍｍ，１．８ ｍ），流动相乙腈一水（２５：７５，Ｖ： ），检测波长２８０ｎｍ。结果：ＣｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌＡ在０．８４８～８．４８ ｇ・ｍＥ－１范围内线性关系良好， ）．９９９９（ｎ＝６），加 样回收率９９．３％，ＲＳＤ＝Ｉ．０１％（ｎ＝６）；６批香附子药材中ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ的含量为３．８５—９．９４ ｇ・ｇ～。结论： ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ为香附子药材中的特征活性成分，所建立的含测方法操作简便，结果可靠，可作为香附子药材 质量控制的指标性成分。 ・关键词：香附子；ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ；ＵＨＰＬＣ；含量测定 中图分类号：０６５７．７ 文献标识码：Ａ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｉｎ ｆｒｕｉｔ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ．ｆｒｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｏｌｉｇｉｎ ｂｙ ＵＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ＤＥＮＧ Ｓｈｉ—ｒｅｎ，ＺＨＵ Ｘｉａ—ｍｉｎ，ＷＡＮＧ Ｃｈｅｎ－ｊｉａｏ，ＸＩＡ Ｌｉｎ—ｂｏ ，ＺＨＵ Ｊｉａｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｕｎｉｕｅｒ ｓｉｔｙ ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｈａｎ １１６６００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｉｎ ｆｒｕｉｔ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ． ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ，ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｃａｒ－ ｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ａ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（３．０ｘｌ５０ｍｍ，１．８ｉｘｍ）ｗｉｔｈ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｗａｔｅｒ（２５：７５，Ｖ：Ｖ）ａｓ ｔｈｅ ｎｏ— ｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２８０ ａｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ＳＵ￣－ｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｄｅｔｅｒ－ ｍｉｎｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇ ｗａｓ ０．８４８－８．４８ｐ，ｇ‘ｍＬ （ｒ＝Ｏ．９９９５）．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝６）ｏｆｔ｝ｅ ｃｙｐｅｍｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｗａｓ ９９－３％．ＲＳＤ＝Ｉ．０１％．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｅｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｉｎ ６ ｂａｔｃｈｅｓ ｗａｓ ３．８５－９．９４Ｉｘｇ。ｇ～．Ｃｃｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｃｙｐｅ－ ｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｗａｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ ｉｎ ｆｒｕｉｔ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ ａｎｄ ｓｅｎｓｉ— ｔｉｖｅ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ． Ｋｅｙ ＷｏｒｄＳ：ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ．；ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ；ＵＨＰＬＣ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 香附子为莎草科植物莎草Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ． 化、抗炎、抗肿瘤等药理活性，被认为是香附子中的 的干燥根茎，具有行气解郁，调经止痛的功效，常用 另一类活性物质，ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ（一种二苯乙烯三 于肝郁气滞，胸胁胀痛，经闭痛经等症『１ ＿，为中医临 聚体）即为其中的代表性成分。目前，国内外尚未见 床常用中药。其主要成分有挥发油类、黄酮类、糖 香附子中ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ含量测定的相关报道。本 类、生物碱类、酚类和萜类等 。目前，对香附成分及 实验拟以ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ为指标成分，以十八烷基 药理活性的研究主要偏重于其挥发油中的倍半萜 硅烷键合硅胶为固定相，建立了香附子药材中 类小极性成分 ，最新研究表明，香附中还含有一类 ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ的ＵＨＰＬＣ分析方法，相对于常规 二苯乙烯低聚物 ，该类化合物具有较好的抗氧 ＨＰＬＣ分析方法而言，该方法具有分离度高、分析时 间短、节约溶剂等诸多优点 ，可为香附子药材的质 量控制提供相关依据。 收稿日期：２０１５—０９—０９ 基金项目：国家自然科学基金项目（８１２０２８５７）；辽宁省高等学校优秀 １实验部分 人才支持计￣（ＬＩＱ２０１５０７０）；２０１４年辽宁省大学生创新创 业训练计划项目（２０１４１０１６２０５５） 作者简介：邓仕任（１９７９一），男，博士，副教授，研究方向为中药药效物 １．１仪器与试药 质基础研究。 Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ高效液相色谱仪（美国安 通信作者：夏林波（１９７７一），女，博士，副教授。 捷伦）；ＭＥＴＩ＇ＬＥＲＡＥ ２４０型十 亍分之一分析天（瑞 ２４ 邓仕任等：ＵＨＰＬＣ法测定香附子中活性成分ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌＡ含量 ２０１５年第ｌ２期 士ＭＥＴＴＬＥＲ）；ＦＡ１００４Ｂ电子天平（上海精密科学 仪器有限公司）；ＫＱ一２５０ＤＢ型数控超声清洗器（昆 山市超声仪器有限公司）。Ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ对照品 为本实验室自行制备，经检测纯度大于９８％（峰面 积归一化法）。甲醇，分析纯；乙腈，色谱纯（天津市 大茂化学试剂厂）；水为娃哈哈纯净水。香附子购自 河北安国药材市场，经辽宁中医药大学中药鉴定教 研室翟延君教授鉴定为莎草科植物莎草Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ Ｌ．的干燥根茎。 １．２色谱条件 安捷伦Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ—Ｃ ８色谱柱（３．０× １５０ｍｍ，１．８ Ｉｎ）；流动相乙腈一水（２５：７５，Ｖ：Ｖ）； 流速０．４ ｍＬ・ｍｉｎ ；检测波长２８０ｎｍ；柱温５Ｏ℃。 １．３对照品溶液制备及线性关系考察 取ｃｙｐｅｍｓｐｈｅｎｏｌ Ａ对照品４．２４ｍｇ，精密称定， 置１００ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，得浓度 为４２－４ＩＸｇ・ｍＬ 的对照品储备液。将该储备液用甲 醇逐级稀释，配成浓度分别为０．８４８、２．５４、４．２４、５．９４、 ７．６３、８．４８ ｇ・ｍＬ 的系列对照品溶液。将上述对照 品溶液依次注入液相色谱仪，进样量为３ Ｌ。以峰 面积为纵坐标，绝对进样量（ ｇ）为横坐标，得回归 方程为ｙ＝３．７８×１０４ｘ＋４３．１，ｃｙｐｅｍｓｐｈｅｎｏｌ Ａ在０．８４８ ８．４８ ｇ范围内呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９５，ｎ＝６）。 １．４供试品溶液的制备 取香附子粉末（过４０目筛）约３．０ｇ，精密称定， 置于锥形瓶中，加入ｌＯＯｍＬ甲醇浸泡过夜，超声提 取３次，每次３０ｒａｉｎ，过滤合并提取液，减压浓缩至 干后，以甲醇溶解后转入１０ｍＬ容量瓶中，定容至刻 度，测定前置于４￣Ｃ保存备用，进样分析前经０．２２ ｉｎ 滤膜过滤，作为供试品溶液。 ２结果与讨论 ２．１精密度实验 精密称取同一香附子药材按１．４项下方法制成 供试品溶液，连续进样６次，测得保留时问ＲＳＤ＝ ０．５６％，峰面积ＲＳＤ＝Ｉ．３３％，表明仪器精密度良好。 ２．２稳定性 精密称取同一香附子药材按１．４项下方法制成 供试品溶液，分别在０、２、４、８、１２、２４ｈ测定峰面积。 平均峰面积为２３３．１，ＲＳＤ＝Ｉ．１０％（ｎ＝６）。表明供试 品溶液在２４ｈ内基本稳定。 ２．３重复性试验 精密称取同一香附子药材６份，按１－４项下方法 制成供试品溶液，测得样品中ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ含量 的平均值为５．５９ ｇ・ｇ－ ，ＲＳＤ＝Ｉ．７８％，证明本方法重 复性良好。 ２．４加样回收率试验 取已知ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ含量（５．５９ ｇ・ｇ一）的药 材９份，每份约３ｇ，精密称量，３份为一组，置具塞 锥形瓶中，每组精密加入低、中、高浓度ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅ－ ｎｏｌ Ａ对照品贮备液，按２＿３项下方法制备供试品溶 液，结果平均加样回收率９９．１％，ＲＳＤ＝２．１３％（ ＝ ９）。 ２．５样品含量的测定 分别取不同产地的香附子药材约３ ｇ，精密称 定，按２＿３项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条 件下进行分析，其色谱峰见图ｌ，记录下峰面积，代 人标准曲线，计算出样品中含有ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ的 含量，结果见表１。 Ａ ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ对照品 Ｂ香附子样品 图１香附子药材ＨＰＬＣ图 Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｏｆ ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｏｓｌ 表１香附子药材中ｅｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ含量测定结果 Ｔａｂ．１ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｙｐｅｒｕｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｉｎ ｅｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｔｕｎｄｏｓ Ｉ． （下转第５０页） 胡小兵等：１，３，５一三溴苯的合成及表征 ２０１５年第１２期 核磁共振信号不明显，表明所测样品具有较高的纯 度。综合氢谱及碳谱分析可知，所测样品为１，３，５一 三溴苯，实验所得样品的纯度较高。 ３结论 本文通过两步反应制备了ｌ，３，５一三溴苯。第一 １４ １３ １２ ｌ１ １０ ９ ８ ７ ６ ５ ４ ３ ２ １ ０—１—２ 化学位移／×１０ （ｂ）”Ｃ—ＮＭＲ ｃ ｎ 步以苯胺、溴素为主要原料，ＨＡｃ为溶剂，通过取代 反应生成２，４，６一三溴苯胺。第二步在水浴回流冷凝 下，加入无水乙醇及苯溶解２，４，６一三溴苯胺，然后 加入亚硝酸钠，浓硫酸，经过重氮化反应，得到 ∞Ｃｈ、０ 卜 、。 ｐ－．卜ｔ＂－ ∞ Ｒｒ、—ｖＢｒ ∞ 加 ｍ ０ ｌ，３，５一三溴苯。经过核磁共振氢谱和碳谱对所制样 品进行了分析表征，结果表明所得产品为目标产物 １，３，５一三溴苯且具有较高的纯度。 参考文献 ＣＯＣ１ Ｂｒ ｌ Ｉ 化学位移／×１０ ２２０ ２００１８１｝ｌ６０１４０ｌＺＵｌ１）０ Ｕ ６０ ４０ ＺＵ Ｕ ［１］ 张浩．藤黄酚的新工艺合成［Ｄ］．湖南大学化学工程，２０１２． ｔｓｕｔｏｓｈｉ Ｊｉｋｅｉ，Ｚｈｅｎｇ Ｈｕ，Ｍａｓａ—ａｋｉ Ｋａｋｉｍｏｔｏ，ａｎｄ Ｙｏｓｈｉｏ Ｉｍａｉ． ［２］ Ｍｉ图２ １，３，５一三溴苯的核磁共振谱 Ｆｉｇ．２ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ １，３，５一Ｔｒｉｂｒｏｍｏｂｅｎｚｅｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｂｒａｎｃｈｅｄ Ｐ０ｌｖ（ｐｈｅｎｙｌｅｎｅ ｓｕｌｉｆｄｅ）ｖｉａ ａ Ｐｏｌｙ （ｓｕｌｆｏｎｉｕｍ ｃａｔｉｏｎ）Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ［Ｊ］．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９６，２９（３）， １０６２—１０６４． 由图２ａ可知，在化学位移８ ７．６１ ｘ １０ 处和 ６ ７．２５×１０ 处都出现了两个核磁共振峰，其中 ８ ７．２５×１０ 处为溶剂氘代氯仿的共振峰，所以所 【３］ Ｍｉｎ Ｗａｎｇ，ＤａＤｊｉ Ｇａｎ，ａｎｄ Ｋａｒｅｎ Ｌ．Ｗｏｏｌｅｙ．Ｌｉｎｅａｒ ａｎｄ Ｈｙｐｅｒ－ ｂｒｎｃｈｅｄ Ｐｏｌａｙ（ｓｉｌｙｌ ｅｓｔｅｒ）ｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｖｉａ Ｃｒｏｓｓ—Ｄｅｈｙｄｒｏｃｏｕ— ｐｉｉｎｇ—Ｂａｓｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｈｙｄｒｏｌｙｔｉｃ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ 测样品只在６ ７．６ｌ×１０ 处有一个核磁共振峰，这 与ｌ，３，５一三溴苯的分子上只有一种氢原子相符合。 图２ｂ中，在８ ７６．９７×１０ 处的三重峰为溶剂峰，分 别在６ １３２．９９和８ １２３．３４×１０ 处出现了两个核 磁共振峰，表明所测样品有２种碳原子，这与１，３，５一 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ Ａｔｏｍｉｃ Ｆｏｒｃｅ Ｍｉｃｒｏｓｃｏ ｐｙ［Ｊ］．Ｍａｃｒｏ－ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００１，３４（１０），３２１５—３２２３． ［４］ Ｇｕｈｕａｎ Ｌｉｕ，Ｇｕｏｆｅｎｇ Ｚｈａｎｇ，Ｊｉｎｍｉｎｇ Ｈｕ，Ｘｉａｏｒｕｉ Ｗａｎｇ，Ｍｉｎｇｑｉａｎｇ Ｚｈｕ，ａｎｄ Ｓｈｉｙｏｎｇ Ｌｉｕ．Ｈｙｐｅｒｂｒｎｃｈｅｄ Ｓｅｌａｆ－Ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ （ｈＳ１Ｐｓ）ｆｏｒ Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｐａｙｌｏａｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｅ－ ｔｉｏｎｌＪ Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０１５，１３７（３６），１１６４５—１１６５５． 三溴苯的分子结构相符合。此外，在图２中杂质的 （上接第５６页） ［２］赵小艳，何清玉．合成水基切削液的研制［Ｊ］．合成润滑材料， ２０１０．３７（１）：６—８． ［４］ 李玮，马涛，王森，等．硼酸酯在水基切削液中的应用［Ｊｊ＿工具 技术，２０１０，４４（５）：９３—９５． ［５］ 张佳，杨红刚，陈琛，等．环境友好型含氮硼酸酯的防锈性能研 究［Ｊ］．武汉理工大学学报，２０１ １，３３（１２）：７３—７６． ［３］杨启如，张学风，杨红刚，等．油酸二乙醇胺酰胺硼酸酯对钢铁 缓释性能的影响［Ｊ］．材料保护，２００２，３５（２）：２１—２２．