细胞培养基及其配制方法

序号 化合物名称 含量 mg/L 序号 1 无水氯化钙 .2H 2 O 18 硝酸铁 .9H 2 O 2 19 氯化钾 3 20 无水硫酸镁 4 21 氯化钠 5 22 无水磷酸二氢钠 6 23 丁二酸 7 24 丁二酸钠 8 25 L-盐酸精氨酸 9 26 L-盐酸胱氨酸 10 27 甘氨酸 11 28 L-盐酸组氨酸 12 29 L-异亮氨酸 13 30 L-亮氨酸 14 31 L-盐酸赖氨酸 15 32 16 17 L-甲硫氨酸 L-苯丙氨酸 33 化合物名称 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸 L-缬氨酸 D-泛酸钙 酒石酸胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 含量 mg/L DMEMH 细胞培养基粉末型成分

序号 化合物名称 无水氯化钙 1 硝酸铁 .9H 2 O 2 氯化钾 3 无水硫酸镁 4 氯化钠 5 无水磷酸二氢钠 6 L-盐酸精氨酸 7 L-盐酸胱氨酸 8 L-谷氨酰胺 9 甘氨酸 10 L-盐酸组氨酸 11 L-异亮氨酸 12 L-亮氨酸 13 L-盐酸赖氨酸 14 L-甲硫氨酸 15 L-苯丙氨酸 16 含量 mg/L 序号 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 化合物名称 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸钠盐 L-缬氨酸 D-泛酸钙 氯化胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 含量 mg/L DMEML 细胞培养基粉末型成分

序号 化合物名称 无水氯化钙 1 硝酸铁 .9H 2 O 2 氯化钾 3 无水硫酸镁 4 氯化钠 5 无水磷酸二氢钠 6 L-盐酸精氨酸 7 L-盐酸胱氨酸 8 L-谷氨酰胺 9 甘氨酸 10 L-盐酸组氨酸 11 L-异亮氨酸 12 L-亮氨酸 13 L-盐酸赖氨酸 14 L-甲硫氨酸 15 L-苯丙氨酸 16 含量 mg/L 序号 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 化合物名称 L-丝氨酸 L-苏氨酸 L-色氨酸 L-酪氨酸钠盐 L-缬氨酸 D-泛酸钙 氯化胆碱 叶酸 肌醇 烟酰胺 核黄素 盐酸硫胺 盐酸吡哆辛 葡萄糖 丙酮酸钠 酚红 含量 mg/L DMEM专题DMEM细胞培养基二配制方法及注意事项 配制方法： 1在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水;2在室温20℃到30℃的水中加入干粉培养基,轻轻搅拌,不要加热; 3水洗包装袋的内部,转移全部的痕量干粉到容器内; 4加NaHCO3到培养基中; 5用双蒸水稀释到想要的体积,搅拌溶解;注意不要过分搅拌; 6通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值,由于pH值在过滤时会上升到,因而调节pH值使它比最终想要的pH值低到;培养基在过滤前要保持密封; 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书;说明书都注明干粉不包含的成分,常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等;这些成分有些是必须添加的,如NaHCO3、谷氨酰胺,有些根据实验需要决定; ●配制是要保证充分溶解,NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加; ●配制所用的水应是三蒸水,离子浓度很低; ●所用器皿应严格消毒; ●配制好的培养基应马上过滤,无菌保存于4度; ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基,它是一种灭菌后保证无菌的溶液,必要时可制成无内毒素等的溶液,可节省科研人员的工作量; DMEM各种成分都有什么作用

一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物;

1无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的;

2氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸L型都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸,不能由其他氨基酸或糖类转化合成;除此之外,还需要谷氨酰胺glutamine;谷氨酰胺具有特殊的作用,对细胞的培养特别重要,能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源,还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料;细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质,谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡;在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺;值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定,故4℃下放置1周可分解50%,使用中最好单独配制,置-20℃冰箱中保存,用前加入培养液中;

3维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质,在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶,对细胞代谢有重大影响;

4碳水化合物：是细胞生命的能量来源,有的是合成蛋白质和核酸的成分;体外培养动物细胞时,几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质;

5葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下,葡萄糖主要经糖酵解降解,产生过量的乳酸;减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量,但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足,细胞生长抑制;在目前常用的培养基中,葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源,其能量代谢通路与体内完全不同,表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量,谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径,另一小部分通过完全氧化为细胞供能;

6除了以上与细胞生长有关的物质以外,培养基中一般还要加入酚红当溶液酸性时pH小于呈黄色；当溶液碱性时pH大于呈红色,一种pH指示剂;