淀粉酶国家标准

ICS XXXX XXXX

GBGB 8275—××××代替GB 8275—1987

中华人民共和国国家标准

食品添加剂 α－淀粉酶制剂 Food additive Alpha-amylase Preparation （征求意见稿） 2008-××-××发布 2008-××-××实施中华人民共和国质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会

发布

GB ××××—××××

前 言

本标准中A型产品卫生要求非等效于联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会的食品添加剂标准纲要第一卷（Compendium of Food Additive Specifications，Volume 1，Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additive（JECFA））中食品工业用酶制剂通则中“卫生指标”及美国《食品化学品法典》第五版（FOOD CHEMICALS CODEX 以下简称：FCCⅤ）酶制剂“附加要求”部分(additional requirements)。

附录A、附录B为资料性附录,附录C为规范性附录。

本标准代替GB 8257-1987。

本标准由全国添加剂标准化委员会提出。 本标准由全国食品发酵标准化中心技术归口。

本标准由 负责起草。 本标准主要起草人：

II

GB/T 8275—××××

食品添加剂 α－淀粉酶制剂

1 范围

本标准规定了食品加工用α－淀粉酶制剂的术语和定义，技术要求，试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存要求。

本标准适用于以符合GB 2760-2007表C.2批准的菌种来源生产的，经精制提纯制得的用于食品工业的α－淀粉酶制剂。 2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB 191 包装储运图示标志

GB 2760 食品添加剂使用卫生标准

GB/T 47.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 47.3 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 GB/T 47.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 5009.11 食品中总砷及无机砷的测定 GB/T 5009.12 食品中铅的测定

QB/T 1803－1993 工业酶制剂通用试验方法

JJF 1070－2005 定量包装商品净含量计量检验规则

国家质量监督检验检疫总局令第75号 定量包装商品计量监督管理办法 3 术语、定义、符号、缩略语

下列术语、定义、符号、缩略语适用于本标准。 3.1

α－淀粉酶 Alpha-amylase

能水解淀粉分子链中的α-1，4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。 3.2

中温α－淀粉酶活力

1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃、pH＝6.0条件下，1小时液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。 3.3

耐高温α－淀粉酶活力

70℃、pH＝6.0条件下，1min液化1mg可溶性淀粉所需的酶量，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。 4 产品分类

4.1 按适用温度

分为中温α－淀粉酶制剂和耐高温α－淀粉酶制剂。 4.2 按产品形态

3

GB ××××—××××

分为液体酶制剂和固体酶制剂。 5 要求

5.1 净含量

按国家质量监督检验检疫总局令第75号执行。 5.2 外观

固体剂型：黄褐色固体粉末。无霉变、潮解、结块现象，无异味。易溶于水。 液体剂型：黄褐色至深褐色液体，无异味，允许有少量凝聚物。 5.3 理化要求

应符合表1的规定。

表1 α－淀粉酶制剂的理化要求

项目

液体剂型

固体剂型

中温α－淀粉酶制剂

酶活力*（u/mL或u/g）

≥ pH值(25℃) 干燥失重/%≤ 耐热性存活率/% ≥

5.5～7.0 — — 2000

耐高温α－淀粉酶制剂

20000

中温α－淀粉酶制剂 耐高温α－淀粉酶制剂

2000

20000

5.8～6.8 — 95

—

8.0

—

—

95

*具体规格可按供需双方合同规定的酶活力规格执行。

5.4 卫生要求

应符合表2的规定。

表2 α－淀粉酶制剂的卫生要求

项目 铅 mg/kg ≤ 砷 mg/kg ≤ 菌落总数cfu/g ≤ 大肠菌群 MPN/100g≤ 沙门氏菌(25g样)

注：使用于蒸馏酒类的产品可不执行表2的规定。

不得检出 3×103

指标

5 3 5×104

6 试验方法

本方法中所用的水，在未注明其他要求时，均指符合GB/T 6682中水的要求。

本方法中所用的试剂，在未注明规格时，均指分析纯(AR)。若有特殊要求另作明确规定。 本方法中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 6.1 净含量

按JJF 1070－2005行。 6.2 外观

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GB/T 8275—××××

称取样品10g（mL），观察、嗅闻作出判断，做好记录。 6.3 酶活力 6.3.1 原理

α－淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的α－1，4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。 6.3.2 试剂和溶液 6.3.2.1 碘

6.3.2.2 碘化钾 6.3.2.3 原碘液

称取11.0和22.0化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，贮存于棕色瓶中。 6.3.2.4 稀碘液

吸取原碘液2.00mL，加20.0g钾用水溶解并定容至500mL，贮存于棕色瓶中。 6.3.2.5可溶性淀粉溶液（20g/L）

称取2.000g（精确至0.001g）可溶性淀粉（以绝干计）于烧杯中,用水调成浆状物，边搅拌边加入沸水90mL，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100mL。溶液现配现用。

注：可溶性淀粉应采用浙江菱湖食品化工联合公司（湖州展望化学药业有限公司）生产的酶制剂专用可溶性淀粉。

6.3.2.6磷酸缓冲液（pH＝6.0）

称取45.23g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）和8.07g柠檬酸（C6H8O7·H2O），用水溶解并定容至1000mL。用pH计校正后使用。

6.3.2.7 盐酸溶液c（HCl）=0.1mol/L：按GB/T 601配制 6.3.3 仪器和设备

除实验室常规仪器外还有： 6.3.3.1 分光光度计 6.3.3.2 恒温水浴 6.3.3.3 秒表

6.3.3.4 试管 25mm×200mm。 6.3.4 分析步骤

6.3.4.1 待测酶液的制备

称取1g～2g酶粉（精确至0.0001g）或准确吸取酶液1.00mL，用少量磷酸缓冲液（6.3.2.6）充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液（6.3.2.6）充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用缓冲液（6.3.2.6）定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，滤液待用。

注：待测中温α－淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在3.4-4.5u/ml范围内，待测耐高温α－淀粉酶活力控制酶浓度在60-65u/ml范围内。 6.3.4.2 测定

——吸取20.0mL可溶性淀粉溶液（6.3.2.5）于试管（6.3.3.4）中，加入磷酸缓冲液（6.3.2.6）5.00mL，摇匀后，于60℃±0.2℃（耐高温α－淀粉酶制剂70℃±0.2℃）恒温水浴中预热5min。 ——加入1.00mL稀释好的待测酶液（6.3.4.1），立即计时，摇匀，准确反应5min。

——立即用自动移液器吸取1.00mL反应液，加到预先盛有0.5mL盐酸溶液（6.3.2.7）和5.00mL稀碘液（6.3.2.4）的试管中，摇匀，并以0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液为空白，于660nm波长下，用10mm比色皿迅速测定其吸光度（A）。根据吸光度查表C1，求得测试酶液的酶活力。 6.3.4.3 计算

α－淀粉酶制剂的酶活力按式（1）计算：

X1＝c×n …………………………………（1）

5

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其中：

X1——样品的酶活力，单位为u/mL或u/g；

c——测试酶液的酶活力（浓度），单位为u/mL或u/g； n——样品的稀释倍数。 所得结果表示至整数。

耐高温α－淀粉酶制剂的酶活力按式（2）计算：

X2＝c×n×16.67 …………………………………（2） 其中：

X2——样品的酶活力，单位为u/mL或u/g；

c——测试酶液的酶活力（浓度），单位为u/mL或u/g； n——样品的稀释倍数;

16.67——根据酶活力定义计算的换算系数。 所得结果表示至整数。 6.3.5 允许差

平行试验相对误差不得超过2％。 6.4 pH值

按QB/T 1803-1993中第9章执行。

6.5 耐高温α－淀粉酶制剂耐热性存活率 6.5.1 试剂和溶液

6.5.1.1 氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1/L]:按GB/T 601配制。 6.5.1.2 糊精溶液

称取糊精100.0g于烧杯中，加水300mL,搅匀，加入耐高温α－淀粉酶制剂（按每克糊精13u酶活力加入），置于电炉上加热至沸腾，冷却，用氢氧化钠溶液（6.5.1.1）调pH至6.0～7.0，移入500mL容量瓶，稀释，定容，摇匀备用。 6.5.2 仪器和设备

6.5.2.1 恒温水浴：精度±0.1℃。 6.5.3 分析步骤

6.5.3.1 待测酶液的制备

除用糊精溶液（6.5.1.2）代替缓冲溶液（6.3.2.6）外，其余同6.3.4.1， 6.5.3.2 热处理

吸取25mL待测酶液于50mL比色管中，置于95℃恒温水浴中热处理60min，冷却，补水至原酶液体积，摇匀，备用。

6.5.3.3 酶活力测定

——按6.3.4.2测定制备6.5.3.1时所用酶制剂的酶活力； ——按6.3.4.2测定待测酶液（6.5.3.1）的酶活力。 6.5.4 计算

耐热性存活率按式（3）计算

X3＝E1/E×100 ……………………………(3) 其中：

X3——样品酶耐热性存活率，单位为％；

E——样品热处理前实测的酶活力，单位为u/mL或u/g；

E1——样品热处理后实测的酶活力，单位为u/mL或u/g。

所得结果表示至整数。 6.6 铅

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GB/T 8275—××××

按GB/T 5009.12执行。 6.7 砷

按GB/T 5009.11执行。 6.8 菌落总数

按GB/T 47.2执行。 6.9 大肠菌群

按GB/T 47.3执行。 6.10 沙门氏菌

按GB/T 47.4执行。 7 检验规则

7.1 批次的确定

由生产单位按照其相应的规则负责确定产品的批号，批内产品的品质应均一。 7.2 取样规则和样本量

取样应均匀分布在整个灌装过程中，或均匀分布于灌装后的成品中。 取样时应采用适宜的方法保证取样具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。对用于微生物检验的取样，应使用无菌操作。

成品抽样的样本量见表3。取样的样本量可按照估计的批量参照表3执行，或由生产企业和/或相关方确定。

表3 成品抽样的样本量

批量/桶（或箱） <50 51～500 ＞500

样本量/桶（或袋） 2 3 5

注：1.批量是指批中所包含的单位商品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的样本单位数，单位为瓶或袋。

2.批取样量不得少于300mL（或300g），不足者应按比例适当加取

7.3 出厂检验

每批产品出厂时，应对外观、酶活力、pH、菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌及包装、标签等逐项进行检验。

7.4 型式检验

产品遇有下列情况之一时按本标准全部要求进行检验： ——正常生产时，至少每年对产品检验一次；

——正常生产时，如原料、配方或工艺有较大改变，可能影响产品质量时； ——更换设备，或产品长期停产又恢复生产时； ——出厂检验结果与平常记录有较大差别时； ——国家质量监督部门提出要求时。 7.5 判定规则

出厂检验和/或型式检验合格时，由质量检验部门出具产品合格证。

出厂检验和/或型式检验不合格时，在原批次基础上加倍取样分析。如仍不合格，判定该产品为不合格品，不得出厂。

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8 标志、包装、运输及贮存

8.1 标志

产品的外包装宜使用符合GB/T 191要求的标志。

产品的内包装上应贴有牢固的标签。产品的标签的内容应符合卫生部[2002]第26号令第四章的要求。标识内容应包括品名、产地、厂名、卫生许可证号、规格、配方或主要成分、生产日期、批号或代号、保质期限等。 8.2 包装

产品的内包装和/或包装容器的内涂料应采用国家批准的材料，应符合相应的食品包装用/食品容器卫生标准的材料。 8.3 运输

产品在运输过程中应轻拿轻放，严防雨淋和曝晒。运输工具应清洁、无毒、无污染。严禁与有毒、有害、有腐蚀性的物质混装混运。 8.4 贮存

产品应贮存在阴凉干燥的环境下。严禁与有毒、有害、有腐蚀性的物质同存。 8.5 保质期

8.5.1 在25℃以下，液体酶制剂保质期不少于90天；固体酶制剂保质期不少于180天，企业应按上述要求具体标示。

8.5.2 在保质期内，实测酶活力不应低于标示酶活。

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GB/T 8275—××××

附 录 A （资料性附录）

α－淀粉酶活力的测定 目视比色法

A.1 术语和定义

α－淀粉酶活力

1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃、pH 6.0条件下，1h液化可溶性淀粉的克数来表示（克可溶性淀粉/克·小时或克可溶性淀粉/毫升·小时）。 A.2 原理

α－淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的α－1，4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性 有关，据此计算酶活力。 A.3 试剂

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 A.3.1 原碘液

称取结晶碘11.0g，碘化钾22.0g，先用少量蒸馏水使碘完全溶解后，再加蒸馏水定容至500mL，贮于棕色瓶内。

本溶液在冷藏（4°C ～8°C）条件下的保存期为2个月。 A.3.2 稀碘液

取原碘液2.00mL，加碘化钾20.0g，加蒸馏水溶解定容至500mL，贮于棕色瓶内。 A.3.3 2%可溶性淀粉溶液（HG-3-3095），质量体积比2%

称取2.00g可溶性淀粉（以绝干计），用少量蒸馏水调匀，徐徐倾入煮沸的蒸馏水中，加热煮沸至透明为止，冷却定容至100mL。此溶液当天配制当天使用。 A.3.4 0.02M磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液（pH6.0）

称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23g和柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.07g，用蒸馏水溶解定容至1000 mL，配好后应以酸度计校正pH值为6.0。 A.3.5 标准终点色溶液

A液：称取氯化钴（COCl·6 H2O）40.2349g和重铬酸钾0.4878g，用蒸馏水溶解定容至500mL。 B液：称取络黑T（C20H12N3NaO7S）40.0mg，用蒸馏水溶解定容至500mL。 A.4 待测酶液的制备

称取酶粉1g～2g（精确至0.1mg）或量取酶液1.00mL，先用少量40°C，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液（A.3.4）溶解，并用玻璃棒捣碎，将上层清液小心倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再加入少量上述缓冲溶液，如此反复研捣3～4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲溶液定容至刻度，摇匀，通过四层纱布过滤，再用滤纸滤清，滤液供测定用。 A.5 分析步骤

取2.0mL标准终点色溶液（A.3.5）于白瓷板空穴内，作为比色标准，其它空穴内滴入1.5mL稀碘液（A.3.2）。取2%可溶性淀粉20mL（A.3.3）和磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液（A.3.4）5mL于25mm×200mm试管中，于60°C恒温水浴中预热4 min～5min。随后加入预先稀释好的酶液（A.4）0.5mL，立即计时，

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充分摇匀，定时用吸管取出反应液0.5mL，滴于预先滴有稀碘液的瓷板穴内，当穴内颜色由紫色逐渐变为红棕色，与标准终点色相同时，即为反应终点，记录时间。

注：①酶反应全部时间控制在2 min～2.5min内；

②测定时照明采用日光灯。

③白瓷板可用10mL比色管代替。 A.6 结果的计算和表示

酶活力按（A1）式计算

X=(

60

×20×2%×n)/0.5……………（A1） T

式中：

X——酶活力单位，单位为u/g或u/mL； T——测定时间，单位为min； n——稀释倍数； 60——分钟数；

20——吸取可溶性淀粉的毫升数，单位为mL； 2%——可溶性淀粉溶液浓度；

0.5——测定时稀酶液吸取量，单位为mL。 结果保留至整数位。

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附 录 B （资料性附录）

α－淀粉酶活力的测定 全自动生化分析仪法

B.1 范围

本方法规定了α－淀粉酶活力的测定方法。

本方法适用于用全自动生化分析仪测定α－淀粉酶制剂中α－淀粉酶的活力。本方法不适用于洗涤剂等产品中α－淀粉酶活力的测定。

样品中所有能够分解底物的淀粉酶在本试验中均会被测定，导致结果偏大。 试样中蛋白酶的存在会使试验结果偏小。但若遵循配置步骤中所述的措施去预防，本方法仍可使用。 B.2 术语和定义

U

α－淀粉酶的活力单位，单位定义同所使用的标准品。 B.3 原理

样品中的α-淀粉酶和反应试剂中的α-葡糖苷酶能水解底物（4,6-亚乙基(G7)-p-硝基苯基(G1)-α,D-麦芽庚糖苷（亚乙基- G7PNP））形成葡萄糖，并同时产生黄色的p-硝基苯酚。 p-硝基苯酚的生成速度可以通过全自动生化分析仪进行检测。反应速度和酶活力成比例。反应过程见图1。

图1 反应过程

B.4 试剂

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 B.4.1 氯化钙溶液

称取441.0 g二水合氯化钙到烧杯中。用一定量的水溶解后加入质量分数为15%的聚氧化乙烯十二烷基醚溶液16.5 mL，搅拌均匀。最后用水定容至1 000 mL。

本溶液在冷藏（4°C ～8°C）条件下的保存期为2个月。 B.4.2 稳定剂

取上述配制好的氯化钙溶液2.5 mL，用水定容至250 mL。 本溶液使用前配制。

B.4.3 苯基甲基黄酰氟（PMSF）溶液

称取5.0 g的苯基甲基黄酰氟，用无水乙醇溶解并定容到250 mL。 本溶液在冷藏（4°C ～8°C）条件下的保质期为1年。 B.4.4 α-葡糖苷酶试剂和底物

α－葡糖苷酶试剂（R-1）和底物（R-2）为市售试剂，如AMYL Roche/Hitachi，118-773 Roche Diagnostics。使用时参照生产厂家的说明。

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GB ××××—×××× B.5 仪器

B.5.1 全自动生化分析仪：要求带有进样/搅拌系统、温度控制系统（37°C ±0.3°C）和检测系统。检测系统要求在405 nm下连续检测吸光度的变化。 B.5.2 分析天平：精度为0.0001 g。 B.5.3 酸度计：精度为0.01 pH单位。 B.6 分析

B.6.1 标准曲线的制备

称取一定量的已知活力α－淀粉酶标准品，精确到0.0005 g。用稳定剂（A.4.2）溶解并定容在 100 mL的容量瓶中得到标准储备液。标准品称取的量要使标准储备液中α－淀粉酶的活力为60.345 U/mL。

标准曲线的范围宜在（2.01～6.03）U/mL。在此范围之内方法的使用者可以选择5个不同的浓度配制标准曲线工作溶液。标准曲线的线性相关系数需≥0.995。

根据产品特性的不同，方法的使用者可以选择其他的标准曲线范围，但必须满足以上的标准曲线线性相关系数的要求。

标准储备液和标准曲线使用前配制。 B.6.2 标准对照品的制备

如可能称取另一个批次已知活力的α－淀粉酶作为标准对照。

标准对照溶液的配制方法同标准储备液。稀释液中的酶活力约为25.0 mU/mL。 标准对照溶液使用前配制。 B.6.3 空白

使用稳定剂（A.4.2）为空白。 B.6.4 样品溶液的制备 B.6.4.1 α－淀粉酶试样

称取一定量的酶样品，用稳定剂（A.4.2）溶解和稀释。稀释的倍数要使得最终稀释液的酶活力在标准曲线的范围之内范围内。

样品的最小稀释倍数为20。

B.6.4.2 含有蛋白酶的α－淀粉酶试样

对于含有蛋白酶的样品，分析中应加入苯基甲基黄酰氟溶液（A.4.3），以避免蛋白酶的干扰。 在制备含有蛋白酶的α－淀粉酶试样时，应按照所使用的容量瓶体积的0.1%体积分数加入苯基甲基黄酰氟溶液。其他配制过程同A.6.4.1。 B.6.5 自动分析步骤和参数 B.6.5.1 步骤

—— 将200 μL的α-葡糖苷酶R-1（A.4.4）转移到比色皿中；

—— 分别将16 μL的空白、标准、标准对照或样品转移到比色皿中； —— 上述两种溶液的混合物在37°C 保温300 s；

—— 分别在每个比色皿中加入20 μL的底物-R2（A.4.4）。混合保温180 s后开始测定； —— 每隔18 s测定一次吸光度。每个样品共测7次。 B.6.5.2 参数

B.6.5.2.1 保温周期

温度：37℃； 时间：300 s；

α-葡糖苷酶R-1和试样：200 μL + 16 μL； B.6.5.2.2 酶反应周期

温度：37℃；

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时间：180 s； 底物-R2：20μL； B.6.5.2.3 测定周期

测定模式：动力学法； 波长：405 nm； 曲线类型：非线性； 时间：120 s； 读数：7次； 间隔：18 s。 B.7 结果的计算和表示

B.7.1 标准曲线的计算

标准曲线应为直线。其中Y 轴单位为OD/min，X 轴单位为标准点的酶活力mU/mL。 B.7.2 样品酶活力的计算

从标准曲线上读出样品最终稀释液的酶活力，单位为mU/mL。 然后，按照下式计算样品的酶活力：

U=

A×F×D

m×1000

式中：

U——样品的酶活力，单位为U/g

A——由标准曲线得出的样品最终稀释液的活力，单位为mU/mL； F——溶解样品用的容量瓶体积，单位为mL； D——稀释倍数；

m——试料的质量的数值，单位为g； 1000——mU到U的单位转换因子。 B.7.3 结果的确认

当标准对照的试验值在可接受的范围之内，且标准曲线为稳定上升的直线时，样品的试验结果有效，可计算平均值。 B.7.4 结果的表示

样品的测定结果用算术平均值表示。 B.8 准确度和精密度

本方法的准确度为99.1%，中间精密度为1.9%（对于最终产品）。

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GB ××××—××××

附 录 C 资料性附录

吸光度与测试α-淀粉酶酶浓度对照表

（略）

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